姐妹染色单体分化染色实验

作者:白雪 | 创建时间: 2023-04-22
实验概要 本文介绍了姐妹染色单体分化染色法(Sister chromatid differentiation,SCD)的实验原理、操作步骤及注意事项等。                                            ...
姐妹染色单体分化染色实验

操作方法

Brdu掺入:细胞培养24h后于培养液中加入Brdu,最终浓度10μg/ml,避光条件下继续培养;

待细胞经历两个细胞周期(48h),培养终止前4h加秋水仙素,秋水仙素终浓度为0.02μg/ml培养液;

常规制片,染色体制片在37℃恒温箱内老化24h;

紫外灯照射:取标本玻片置于大号培养皿内,正面朝上,上覆盖镜头纸,从玻片外镜头纸边沿加2×SSC液致使全镜头纸浸湿,移入60℃水浴锅内,紫外线灯距离5cm,照射30min;

染色:取出照射后标本,蒸馏水冲洗,置pH6.8的2%Giemsa染色10min。

温馨提示

BrdU是一种强突变剂,使用浓度不宜过高,否则会产生细胞毒性作用。
影响SCE的因素:地区与环境,Brdu的浓度,动物的种类,染色体长度,培养时间与温度。
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