操作方法
培养基配制:1640或者l-15中加入0.5%的双抗,小牛血清。配成含10%小牛血清,5%双抗的培养基。
细胞分离:采用胰蛋白酶消化法分离建鲤肝细胞。建鲤麻醉后放干血,无菌条件下取适量肝组织于培养皿中,PBS溶液洗去血后,将肝组织剪碎,加入5~10倍肝重的0.1%胰蛋白酶,27℃消化10-15分钟。待肝组织分散成单个细胞或大量小细胞团时加入适量的FCS终止消化。200目筛过滤,滤液1000 r/min离心5分钟,弃上清,PBS清洗3次。
细胞培养:用L-15培养基(含1%S/P和10%FCS)调整细胞浓度为1×106个/mL,接种到24孔板中,每孔1 mL,27℃培养24 h后,备用