1.原理:
将 Transwell 小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上室内盛装上层培养液,下室内盛装下层培养液,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。将 细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
2.实验方法:
取对数生长期的肿瘤细胞,以0.1% 牛血清蛋白(BSA)DMEM培养液调整细胞数为1×10^6 cells/ml。
取100 ul细胞接种于transwell上室内,加入1.6、4.0、10.0 mg/ml BSGLEE处理过的细胞,对照组加入等体积无血清DMEM培养液,每组设3个复室。
下室加入含15%小牛血清的DMEM培养液500 ul,37℃、5% CO2培养24h后,将滤膜上层的细胞用棉签抹去,滤膜以甲醇固定5min。
用Giemsa染料染色15min。
100倍光镜下选择上下左右中5个不同视野的穿过膜的细胞数,求平均值,按下式计算药物对肿瘤细胞的迁移能力。 迁移抑制率=(1-实验组平均迁移细胞数/对照组平均迁移细胞数)×100%。