怎样做RNA的琼脂糖凝胶电泳
作者:滴水穿石 | 创建时间: 2023-07-29
RNA样品电泳后,可见28S、18S及5S小分子RNA条带,则说明完整性好。若有降解可能是操作不当或污染了RNase.。28S和18S RNA比值约为2:1,表明RNA无降解。如比值逆转,则表明RNA降解。电泳中如果在28S 后方还有条带,...
步骤/方法
配制琼脂糖凝胶。
①称取0.5g琼脂糖,置干净的100ml 锥形瓶中,加入40ml蒸馏水,微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。
②待胶凉至60--70 ℃,依次向其中加入9ml甲醛、5ml 10X MOPS缓冲液和0.5μ|溴化乙锭,混合均匀。
③灌制琼脂糖凝胶。
样品准备:
① 取DEPC处理过的500μ|小离心管,依次加入如下试剂: 10x MOPS缓冲液2ul,甲醛3.5μ|,甲酰胺(去离子)10μ|,RNA 样品4.5μ|,混匀。
② 将离心管置于60℃水浴中保10分钟,再置冰上2分钟。
③ 向管中加入3μ| 上样染料,混匀。
电泳:电泳槽内加入1XMOPS缓冲液,于7.5V/ml 的电压下电泳。
温馨提示
快速的操作,低温环境,少量取上清
主要是抽提之后吸取上清时要特别小心,只要不把蛋白层吸出来就不会有RNase污染。
提取RNA所用的玻璃容器的处理方法,是用前180度干烤8小时或更长时间;另一种方法是0.1%的depc水浸泡(37度 2小时),然后灭菌水淋洗数次,100度干烤15分钟,然后高压灭菌除去depc.
提取RNA所用的枪头,EP管。直接高压烘干即可。如果用0.1%DEPC处理,要在DEPC配置后振摇1小时后再浸泡枪头,EP管方有效。我做的都是将枪头泡在配制好的depc中,摇振过夜,然后倒掉depc注意要到干净,再高压,为了防止仍残留液体可120度干烤一会