操作方法
接种人胚胎干细胞时必须要利用MEF(小鼠胚胎成纤维细胞)，所以就需要培养MEF并且在接种细胞时也必须要进行合理的操作，MEF的生长速度非常快如果操作不慎就会导致其出现有丝分裂，因此在培养时必须使用丝裂霉素C或δ射线来处理MEF，具体的操作方法如下: 1.首先用MMC来处理培养皿，接下来将培养液去除，再将其加入50ml的离心管中控制MMC的浓度在10μg/ml 2.将每个培养皿中剩余的5买了溶液去除，在将离心管中的MMC按照15ml一个加入到培养皿中，37℃孵育3小时； 3.37℃预热MEF培养基与0.05%胰酶，在50ml离心管中加入20ml预热好的培养基； 4.在培养箱中取出3个培养皿，把上面的培养基去除再用5ml1×PBS清洗一次加入5ml胰酶； 5.待细胞飘起后吸入离心管中，用胰酶冲洗培养皿把剩余细胞冲至离心管中； 6.37℃重新预热MEF培养基最后冲洗一次加到离心管内后记录细胞数量，室温、500-600g、离心5分钟； 如果需要接种新处理的MEF按照下列步骤操作：37℃预热MEF培养基后重悬细胞，将其接种到6孔培养板中调整期密度4×106个细胞即可。