操作方法
颈椎脱臼法处死小鼠。解剖小鼠腹部。扒开内脏,可看到如图所示的长约3-4厘米呈长条状的深红色组织,即为脾脏;
将分离得到的脾脏组织浸泡在干净的PBS溶液中;
在一个培养皿中加入适量的PBS溶液,放一个细胞筛,将脾脏取出放于细胞筛中。取干净的注射器,用其按压处的末端对组织进行碾压。膜内细胞会慢慢游离出来,经过细胞筛之后,悬浮在培养皿溶液中;
洗一洗细胞筛,收集细胞筛外PBS,400g, 50ml离心管离心,15min;
去上清,加红细胞裂解液2ml,重悬。37度2min;
离心400g,15min,PBS 5ml洗一遍,离心400g,除去上清;
细胞培养基重悬5ml,除去其中不可溶的组织纤维,悬浮液取100ul细胞计数;
稀释细胞,培养或者铺板。