人外周血单核细胞(PBMC)分离及培养

作者:活力源 | 创建时间: 2023-05-11
PBMC(peripheral blood mononuclear cell),外周血单个核细胞,顾名思义,其主要细胞类型为血液里边具有单个核的细胞,主要包括淋巴细胞(T\B),单核细胞,吞噬细胞,树突状细胞和其他少量细胞类型。其中淋巴细胞...
人外周血单核细胞(PBMC)分离及培养

操作方法

配制所需的溶液: a. 细胞培养基:RPMI 1640+10% FBS+1% P/S; b. 细胞冻存液:FBS中加入10%DMSO;

将10ml全血转入50ml离心管中,加入10ml PBS溶液稀释,轻轻混匀;

取两支15ml离心管,先加入5ml Ficoll溶液。然后将稀释的血液轻轻加到两支离心管的ficoll上层,一定要轻柔,避免两种溶液混合在一起,每只离心管各10ml稀释血液;

2,000rpm,20min,注意,降速设置中一定要设置成no break,或者只有1-2成的制动。离心完毕将得到如图所示分层;

PBMC所在细胞层为白色。此时可以用吸管将该层细胞吸取在另一干净的15ml离心管中。

加入PBS至10-15ml,1,500rpm,10min离心后去掉上清,再加入培养基进行相同操作的清洗;

加入5-10ml培养基重悬细胞,进行后续计数培养或者铺板;

细胞冻存:将细胞离心收集之后,用细胞冻存液重悬。取1-1.5ml细胞至冻存管中,放入冻存盒(冻存盒可事先在4℃冰箱预冷)。再将冻存盒放置于-80℃冰箱过夜。第二天将细胞转入液氮中长期保存。

温馨提示

全血溶液可以加在Ficoll上层或者下层,但是最终都必须保证两种溶液分层清晰。
分离PBMC第一步离心的时候,一定不能设置或设置低水平的制动。否则将分层混乱。
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