流式检测细胞周期操作步骤

细胞培养： 取对数生长期的细胞，按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内，进行所需的处理（比如加入药物），特定时间后终止培养，进行下一步的实验。

细胞固定： 800rpm离心5min，收集细胞沉淀，弃上清，用预冷PBS洗涤两次，加入预冷75%乙醇，于4℃固定4h以上。

细胞染色： 1500rpm离心5min，弃上清，以3mL的PBS洗涤一次，加入400uL的CCAA溶液（PI染液,50ug/mL,engreen），100ul的 RNase A（100ug/mL ），4℃避光孵育30min。

流式分析： 以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2~3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。